3- Une méthode pour supprimer les faux signaux positifs dus au conjugué dans le cas de l'analyse par immunobloting des allergènes du blé,

Auteurs

Isabelle Bouchez-Mahiout, Élodie Boulenc, Jacques Snégaroff, Michel Laurière

Résumé

Les préparations d’anticorps secondaires utilisées pour les analyses par immunoblotting des protéines alimentaires produisent souvent des signaux faussement positifs lorsqu’elles sont associées à des méthodes de détection très sensibles, comme la chimiluminescence. Lors de l’étude des protéines de blé, on a observé que de telles réactions indésirables étaient dues à la présence d’anticorps mineurs dirigés contre les protéines provenant de l’alimentation de l’animal utilisé pour produire ces préparations. Le lait délipidé, un bloquant classique, supprime ces réactions, mais diminue également fortement le signal spécifique lorsqu’il est utilisé tout au long du protocole.

Une procédure simple de double-saturation de la membrane a été développée, à savoir l’utilisation d’une solution à base de polyvinylpyrrolidone-40 pour toutes les étapes, sauf pour l’incubation avec le conjugué où une saturation à base de lait délipidé est utilisée. Dans ces conditions, les réactions non spécifiques sont éliminées tout en maintenant le signal spécifique. La procédure est appliquée à la détection des IgE réactifs avec les allergènes de blé.

Mots clés

réactifs de saturation, chimiluminescence, détection des IgE, protéines de blé, réactions non spécifiques, immunotransfert