Préparations de matériel lignocellulosique, cellules d’observation et contraintes associées pour une imagerie multi-techniques de la dégradation enzymatique

Auteur(s)

Sylvie Durand¹, Camille Alvarado¹, Brigitte Bouchet¹, Stéphane Lefrançois² et Laurent Helary¹

Résumé

La préparation des échantillons est une étape essentielle pour leur étude par microscopie photonique et microspectroscopie. Différentes préparations de coupes d’échantillons ont été testées pour l’observation sans marquage préalable de la localisation des enzymes, des constituants des parois végétales et de leurs évolutions au cours de la dégradation. La préparation de coupes paraffine a été retenue pour l’acquisition d’images spectrales et hyperspectrales en temps réel. Deux méthodes d’imagerie complémentaires et corrélables ont été utilisées :

• la microscopie de fluorescence avec une excitation dans l’UV profond permet d’obtenir des informations sur la localisation des enzymes par imagerie multi-échelles.
• la microspectroscopie FT-IR avec l’utilisation d’une cellule microfluidique permet le suivi en temps réel du changement de composition des parois sous l’action des enzymes.

Mots clés

préparation d’échantillon, imagerie en temps réel, enzyme, fluorescence, Infrarouge.